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Comment utiliser la colle de séparation? - partie 2

Nombre Parcourir:0     auteur:Éditeur du site     publier Temps: 2022-09-09      origine:Propulsé

Utilisation colle de séparation

3 Précautions et problèmes communs:

1) La taille entre le papier filtre, la colle et la membrane est généralement du papier filtre> = membrane> = colle.

2) Il ne doit pas y avoir de bulles entre le papier filtre, la colle et la membrane, qui provoquera un court-circuit.

3) En raison de l'hydrophobicité de la membrane, la membrane doit d'abord être complètement mouillée dans le méthanol. De plus, le film doit être mouillé à tout moment dans l'opération ultérieure (à l'exception de la méthode du film sèche).

4) Le papier filtre peut être réutilisé. Il existe de nombreuses protéines transférées adsorbées dans le papier filtre supérieur (membrane), de sorte que les papiers du filtre supérieur et inférieur ne doivent pas être mélangés. S'ils ne peuvent pas être distingués, le papier filtre en caoutchouc peut être remplacé.

5) Le temps de transfert est généralement de 1,5 heure (1 mA-2MA / cm2, du gel à 10%), et le temps de transfert et le courant peuvent être ajustés en fonction du poids moléculaire.

1) Lorsque les sandwichs de film, de colle et de papier plastient, fonctionnent dans une grande assiette avec un tampon de film rotatif. Après l'empilement, transférez les trois vers le dispositif de film rotatif en parallèle. Ne les déplacez plus, car la possibilité de bulles a été complètement éliminée en opérant dans le tampon, il n'est donc pas nécessaire de conduire des bulles

2) À propos du temps de transfert de film: 20 V pour la rotation semi-sèche × 30minFournisseur de tube de gel sérique - Smail

(b) Méthode humide

Nous n'utilisons essentiellement pas cette méthode, nous ne le présenterons donc pas ici.

C Identification de l'effet après les métastases

1. Teinture de colle

Après la coloration avec de la coomassie bleu brillant et décolorisant avec Destain, voyez s'il y a encore des protéines sur la colle pour refléter l'effet du transfert.

2. Film de teinture

Il existe deux types de solutions de teinture, réversibles et irréversibles. Les réversibles incluent Ponceau-S Red, FastGreen FC, CPTS, etc. Après la teinture avec ces colorants, le pigment peut être emporté et la membrane peut être utilisée pour une analyse plus approfondie. Mais des colorants irréversibles, tels que Coomassie Brilliant Blue, India Ink, Amido Black 10B, etc., et le film coloré ne peut pas être utilisé pour une analyse plus approfondie.

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